急,明天考試要用的,用離子沉淀法提取茶葉中的茶多酚詳細(xì)步驟
1. 浸提 稱取一定重量過20目的茶葉末,加入其重量15-25倍的60℃-80℃的熱水,攪拌下恒溫浸提20min-30min,過濾得到茶葉浸提液。即: 以料液比:1/15、1/20、1/25,提取溫度:60℃、70℃、80℃,提取時(shí)間:20min、25min、30min為3因子3水平進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),然后對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析,選出最優(yōu)組合,做驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),如若符合最佳結(jié)果,進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn) 1(料液比) 2(提取溫度) 3(提取時(shí)間) 因素1 1:15 60℃ 20min 因素2 1:20 70℃ 25min 因素3 1:25 80℃ 30min 測浸提液體積,并取樣分析浸提液中茶多酚的含量,計(jì)算浸提液中茶多酚的總量、茶多酚的浸提率。
2.鹽析 加氯化鈉于茶葉浸提液中,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2-6%,靜置0.5-1.5h后過濾(可用抽濾或者離心的方式)。
3.沉淀 在上述濾液中加入茶葉重量2%-5%的亞硫酸氫鈉,然后加入茶葉重量15%-25%的硫酸鋁飽和溶液,加熱至上述最優(yōu)組合溫度,用10%-20%的碳酸氫鈉溶液在快速攪拌下調(diào)節(jié)pH至5-6,此時(shí)有大量沉淀析出,沉淀自然沉降一段時(shí)間后過濾,最后用等體積最有溫度熱水洗滌沉淀三次。
4.酸溶 將沉淀在快速攪拌下放入到茶葉重量1-3倍的pH=2.5-4.5的鹽酸水溶液溶解沉淀,控制酸轉(zhuǎn)溶液的pH=2.5-4.5,酸轉(zhuǎn)時(shí)間10min-50min,少量膠狀沉淀經(jīng)離心分離出去。即: 以酸濃度:pH=2.5,pH=3.5,pH=4.5,料酸比:1:1,1:2,1:3,酸轉(zhuǎn)時(shí)間:10min,30min,50min為3因子3水平進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),在最優(yōu)條件下測酸轉(zhuǎn)溶液體積然后對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析,選出最優(yōu)組合。 1(酸濃度) 2(料酸比) 3(酸轉(zhuǎn)時(shí)間) 因素1 pH=2.5 1:1 10min 因素2 pH=3.5 1:2 30min 因素3 pH=4.5 1:3 50min 測酸轉(zhuǎn)溶液體積并取樣分析計(jì)算酸轉(zhuǎn)溶液中茶多酚的含量和總量,計(jì)算茶多酚經(jīng)過鹽析、沉淀及酸溶后的回收率。
5.萃取 加入茶葉重量2%-5%的NaHSO3至酸轉(zhuǎn)溶液中,然后用體積0.3-1.5倍的乙酸乙酯萃取1-5次,每次萃取時(shí)間2-10min,合并萃取液。 測萃余相體積,并取樣分析計(jì)算萃余相中茶多酚的總量,計(jì)算茶多酚的萃取率。
6.洗滌 加入茶葉重量1-3%的維生素C至萃取液體積0.4倍的水中,用檸檬酸調(diào)節(jié)水溶液的pH=2.5-3.0,等分成2份對乙酸乙酯萃取液洗滌兩次。
7.蒸發(fā)濃縮 將洗滌后的乙酸乙酯相在50~70℃下真空蒸發(fā)回收乙酸乙酯,待濃縮成膏狀物時(shí),加入膏狀物2倍體積的無水乙醇洗滌掛在壁上的物料,繼續(xù)濃縮成稠的膏狀物。 計(jì)算其中茶多酚的含量。 提取過程中茶多酚的分析測定方法(定量) 準(zhǔn)確吸取待測溶液1ml,將其稀釋1~25倍(稀釋成15倍),再從稀釋液中準(zhǔn)確吸取1ml,注入25ml的容量瓶中,加水4ml和酒石酸亞鐵溶液5ml,充分混合,再加pH=7.5的磷酸鹽緩沖溶液至刻度,用1cm比色杯,在波長540nm處,以試劑空白液作參比,測定吸光度。 計(jì)算公式: 茶多酚(g/ml)=1.957AX/500 A:吸光度 X:稀釋倍數(shù)。 1)酒石酸亞鐵溶液 1g硫酸亞鐵和5g酒石酸鉀鈉用水溶解并定容至至1L,放置過夜后使用。 2)pH=7.5的磷酸二氫鉀緩沖液 A液:稱取磷酸氫二納23.877g,溶解并定容至至1L; B液:稱取經(jīng)110度烘干2h的磷酸二氫鉀9.078g,加水溶解并定容至至1L A液85ml和B液15ml混勻即可。